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HPLC液相色谱工作原理及配套纯水机建议

2021-10-13
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。

应用领域:化学、医学、工业、农学、商检和法检等【1】。

HPLC工作原理:

混合物各组分别通过与固定相、流动相之间的相互作用,在色谱柱中进行分离纯化,固定相是存在于色谱柱中一种非常小的多孔颗粒材料,流动相是在高压迫使下通过色谱柱的一种溶剂或混合溶剂。用注射器注入样品,通过一个连接样品回路的阀门,使样品与流动相混合,随后样品中各组分以不同的速率通过色谱柱,由于各组分与固定相之间的吸附能力不同,各组分依次流出色谱柱,通过合适的检测器将组分浓度转换成电信号传递到计算机的HPLC软件上。运行结束后,在HPLC软件中就可以得到色谱图。


工作原理.png


HPLC工作原理图及仪器组成【2】:

HPLC技术优势:

具有高压、高效、高速、高灵敏度、高选择性等特点。

HPLC实验用水建议:

高效液相色谱HPLC流动相的水应该是电导率为18.2 M/cm(25℃)的超纯水,并通过0.22um终端过滤器,除去颗粒物、有机物、无机离子及 CO2等气体的超纯水 。

液相色谱实验建议用低TOC含量的一级水,因为水中的杂质可能:

1、在梯度运行中污染物会产生峰,这将加剧峰的鉴定和量化的困难程度;

2、标准液用含有杂质的超纯水配置时,样品的鉴定和量化时就不会太精确;

3、可能会损坏高效液相色谱HPLC的柱子

液相色谱实验用超纯水机推荐:


smart超纯水机.png


HealForce品牌Smart Mini超纯水机采用全塑模具生产,外观漂亮,体积小,不占实验室空间,为减少产生TOC的来源可能,整机采用简洁化设计,减少主机内纯水管路,采用内置6.5L Mini纯水水箱尽量减少微生物滋生可能性,配备降解TOC含量的UV紫外灯,做到自来水进出纯水和超纯水的一机两用,性价比较高。

HPLC日常操作注意事项【3】【4】

选择流动相时应注意的几个问题:

1、使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。

2、避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。

3、试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积。

4、流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时,流动相不应有较强的紫外吸收,一般检测波长应大于流动相的截止波长。

泵的维护保养:

1、防止任何固体微粒进入泵体,否则会磨损柱塞、密封环缸体和单向阀,因此应预先对流动相进行过滤,可采用Millipore滤膜(0.22μm或 0.45μm )等过滤。泵的入口都应该连接砂滤棒(或片), 输液泵的滤器应经常更换。

2、流动相不应含有任何腐蚀性物质, 含有缓冲液的流动相不应保留在泵内, 尤其是停泵过夜或更长时间。分析工作结束后必须用纯水充分清洗后,再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合固定相,可以是甲醇或甲醇和水)

3、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完,否则空泵运转也会磨损柱塞、密封环或缸体,最终产生漏液。

4、输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力,否则会使高压密封环变形,产生漏液。

紫外检测器维护保养:

1、流通池进入气泡会干扰基线,并极难排出,应使用充分脱气的流动相,以减少气泡的产生。

2、应定期冲洗系统,避免流通池干涸。

3、检测器中氘灯( 光源) 随着使用时间的增加,氘灯强度降低,噪音会不断增大,故分析前柱平衡得差不多时,再打开检测器,分析工作结束及时关闭检测器(频繁开关检测器也会缩短检测器寿命,一般开启间隔少于4小时,不建议关闭检测器)。

4、尘埃在静电的作用下容易覆盖在光学元件上, 使光传播效率降低,增加了光散射, 影响分析效果, 因此检测器周围的环境应保持清洁。

内容引用:

【1】高效液相色谱在中草药质量控制中的应用 .中国知网

【2】图片来源:迪信泰检测平台

【3】赵贝贝,张艳,唐涛,等.高效液相色谱的使用与维护.实验室科学,Jun. 2011,Vol. 14 No. 3

【4】王淑静,毕建杰,柳洪洁,郝建民,等.高校液相色谱使用中常见问题及对策.实验室研究与探索, 11. 2010 ,Vol. 29 No. 11


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